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Journal of Zhejiang University SCIENCE B
ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly
2014 Vol.15 No.2 P.109-200
Articles
Si-sheng Sun, Xiao-mei Chen, Shun-xing Guo
DOI: 10.1631/jzus.B1300011 Downloaded: 5184 Clicked: 8677 Cited: 2 Commented: 0(p.109-115) <Full Text>
创新要点：假蒿（Kuhnia rosmarinifolia Vent.）是幼龄檀香很好的寄主。目前已经对许多药用植物的内生真菌的分离和鉴定进行了大量研究，但是关于檀香和假蒿之间关系的研究报道较少。本研究首次探讨了檀香及其宿主植物假蒿根中内生真菌的数量和种类，为进一步研究两者之间的关系提供一些有用的信息。
研究方法：采用组织块分离法从檀香的根和其宿主植物假蒿的根部材料分离内生真菌，并采用形态学鉴定和分子鉴定手段对分离的内生真菌进行鉴定。
重要结论：从檀香的根和其宿主植物假蒿的根中160个组织块中分离和鉴定了共25个真菌类群，其中青霉属真菌Penicillium sp. 1为檀香根中优势菌，镰孢属真菌Fusarium sp. 1为假蒿根中优势菌。特别有意思的是两种植物根中没有分离到明显相同的内生真菌。
关键词组：檀香；假蒿；内生真菌；青霉属真菌（Penicillium sp.）；镰孢属真菌（Fusarium sp.）
Improvement of a gene targeting system for genetic manipulation in Penicillium digitatum
Qian Xu, Cong-yi Zhu, Ming-shang Wang, Xue-peng Sun, Hong-ye Li
DOI: 10.1631/jzus.B1300213 Downloaded: 3682 Clicked: 7622 Cited: 3 Commented: 1(p.116-124) <Full Text><PPT> 2043
创新要点：低效的基因敲除与丝状真菌非同源末端链接（NHEJ）的DNA双链断裂修复途径有关。为提高柑橘绿霉病菌基因敲除效率，本研究利用农杆菌介导的转化体系，获得NHEJ途径中关键因子Ku80的缺失突变体（ΔPdKu80）。
研究方法：与野生型菌株相比，以ΔPdKu80作为出发菌株，提高柑橘绿霉病菌PdbrlA和PdmpkA的基因敲除效率（见表1）。
重要结论：ΔPdKu80的营养生长、产孢和致病性与野生型菌株基本一致。ΔPdKu80作为出发菌株，能显著提高柑橘绿霉菌的敲除效率。
关键词组：指状青霉；基因敲除；非同源末端链接（NHEJ）；Ku80
Analysis of promoters of microRNAs from a Glycine max degradome library
Yi-qiang Han, Zheng Hu, Dian-feng Zheng, Ya-mei Gao
DOI: 10.1631/jzus.B1300179 Downloaded: 3539 Clicked: 7020 Cited: 5 Commented: 0(p.125-132) <Full Text><PPT> 2243
创新要点：利用生物信息学方法全面解析了大豆降解组文库miRNA的启动子特征，并依据顺式作用元件及靶基因构建了miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控网络。
研究方法：本研究利用TSSP 程序和PlantCARE数据库预测了来自大豆降解组文库的440个miRNA的核心启动子以及369个miRNAs的顺式作用元件，并依据顺式作用元件及靶基因构建miRNA调控网络。
重要结论：83.86%的miRNA在其上游序列中含有启动子，8.64%的miRNA在其下游序列中含有启动子，21.59%的miRNA包含增强子。核心启动子的TATA盒与转录起始位点（TSSs）的分布相似（见图2）。此外，对转录起始位点5'端的顺式作用元件预测为miRNAs的可能功能和表达的时空性提供了线索。miRNAs的顺式作用元件和靶基因的分析显示，部分miRNA的表达与生长素响应因子、赤霉素响应因子之间存在潜在的负反馈调控（见图3）。
关键词组：大豆；MicroRNA（miRNA）；启动子；顺式作用元件；预测
Xiu-ling Yang, Meng-ning Zhou, Ya-juan Qian, Yan Xie, Xue-ping Zhou
DOI: 10.1631/jzus.B1300110 Downloaded: 3596 Clicked: 8203 Cited: 7 Commented: 0(p.133-142) <Full Text><PPT> 2189
创新要点：本研究持续五年追踪田间TYLCV，分析TYLCV的全长基因组序列、分子变异及种群遗传结构，为防控TYLCV提供理论依据。
研究方法：2006至2010年从上海采集了26个TYLCV的分离物，利用高保真性的滚环扩增技术获得TYLCV分离物的全长基因组。应用MEGA5等生物信息学软件分析TYLCV的分子变异。
重要结论：TYLCV自然种群具有与RNA病毒相似的突变率，以基因间隔区的分子变异最大，平均突变率为4.81×10−3（见图2和表2）。TYLCV的大部分基因都处于负向选择，但包含在C1开放阅读框内的C4，却与C1承受着不同的选择压而处于正向选择（见图3和表6）。
关键词组：分子变异；番茄黄化曲叶病毒（TYLCV）；双生病毒；进化
Wei Wu, Pan-pan Yu, Feng-yang Zhang, Hong-xia Che, Zhan-mei Jiang
DOI: 10.1631/jzus.B1300239 Downloaded: 3558 Clicked: 8903 Cited: 6 Commented: 0(p.143-152) <Full Text>
创新要点：在pH 9.0~12.0的热处理条件下，牛乳酪蛋白源ACE抑制肽的抑制活性降低，色泽加深。热处理后的ACE抑制肽对Caco-2细胞和ECV-304细胞没有毒性作用。
研究方法：以ACE抑制活性、游离氨基、色差值和细胞存活率为检测指标，研究了酸碱热处理对ACE抑制肽的稳定性和毒理特性影响。
重要结论：高温和碱性热处理能破坏酪蛋白源ACE抑制肽的稳定性（见图1~3）。
关键词组：血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽；热处理；稳定性；毒理特性
Yi Lan, Qing Wu, Ying-qiu Mao, Qiong Wang, Jing An, Yan-yan Chen, Wen-ping Wang, Bo-chen Zhao, Na Liu, Ye-wen Zhang
DOI: 10.1631/jzus.B1300230 Downloaded: 3992 Clicked: 13404 Cited: 15 Commented: 0(p.153-164) <Full Text><PPT> 2256
创新要点：首次评价了花椒挥发油的皮肤细胞毒性、经皮促透活性及其作用机制。
研究方法：利用表皮角质形成细胞（HaCaT）和真皮成纤维细胞（CCC-ESF-1）评价花椒挥发油的细胞毒性；采用亲水性及亲脂性模型药测定挥发油促透活性的基础上研究其促透作用机制。
重要结论：花椒挥发油具有良好促透活性并具有较低皮肤细胞毒性。
关键词组：花椒挥发油；天然经皮促透剂；透皮吸收；表皮角质形成细胞（HaCaT）；傅利叶变换红外光谱（ATR-FTIR）
Tossapon Wongtangprasert, Wirongrong Natakuathung, Umaporn Pimpitak, Anumart Buakeaw, Tanapat Palaga, Kittinan Komolpis, Nanthika Khongchareonporn
DOI: 10.1631/jzus.B1300181 Downloaded: 3404 Clicked: 7812 Cited: 6 Commented: 0(p.165-172) <Full Text><PPT> 2099
创新要点：本研究建立分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株，筛选出对虾中土霉素残留检测具有较高灵敏度的单克隆抗体2-4F。
研究方法：用细胞杂交技术使土霉素-牛血清白蛋白偶联物免疫的BALC/c雌性小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞融合，建立三株分泌抗土霉素单克隆抗体的杂交瘤细胞株（2-4F、7-3G和11-11A），并制备它们的单克隆抗体。通过icELISA法分析单克隆抗体对土霉素的半抑制质量浓度（IC50）和交叉反应率，明确其灵敏度和特异性。
重要结论：实验结果发现单克隆抗体2-4F具有最高的灵敏度，对土霉素的IC50为7.01 ng/ml，且该单抗特异性强，仅与罗利环素之间有强烈的交叉反应，而与非相关抗生素不发生交叉反应。当利用单克隆抗体2-4F检测虾样品中的土霉素含量时，其批内和批间回收率分别为82%~118%和96%~113%，变异系数分别为3.9%~13.9%和5.5%~14.9%。因此，单克隆抗体2-4F可用于虾产品中土霉素残留分析试剂盒的开发。
关键词组：土霉素；单克隆抗体；酶联免疫吸附测定法（ELISA）；虾
Yue-fei Wang, Jie Wang, Jing Wu, Ping Xu, Yi-qi Wang, Jun-jie Gao, Danielle Hochstetter
DOI: 10.1631/jzus.B1300186 Downloaded: 3854 Clicked: 10052 Cited: 6 Commented: 0(p.173-180) <Full Text><PPT> 2257
创新要点：1. 首次将茶果皮作为一种潜在生物资源研究；2. 首次研究茶果皮多糖这一功能成分；3. 将工艺优化、理化性质和生物活性结合研究。
研究方法：三因素三水平响应面设计（见表1），傅里叶转换红外光谱法分析茶果皮粗多糖的功能团结构（见图3），高效液相色谱法检测单糖组分（见表2），2,2′-氨基-二(3-乙基-苯并噻唑啉-6-磺酸)二铵盐（ABTS）自由基清除法（见图 4a）和铁离子还原能力法（FRAP）（见图4b）分析茶果皮多糖抗氧化活性。
重要结论：1. 茶果皮多糖是一种水溶性的酸性杂多糖蛋白复合物；2. 乙醇分级是一种有效多糖分离手段；3. 茶果皮多糖具有出色的生物活性；4. 茶果皮资源可以作为一种可再生生物资源进行深度的开发。
关键词组：茶果皮；多糖；响应面；抗氧化；α-葡萄糖苷酶抑制
Response of seed tocopherols in oilseed rape to nitrogen fertilizer sources and application rates
Nazim Hussain, Hui Li, Yu-xiao Jiang, Zahra Jabeen, Imran Haider Shamsi, Essa Ali, Li-xi Jiang
DOI: 10.1631/jzus.B1300036 Downloaded: 3690 Clicked: 8141 Cited: 6 Commented: 0(p.181-193) <Full Text><PPT> 2239
创新要点：这篇论文研究了不同的氮肥种类（硝态氮与铵态氮）与低、中、高施用量对种子生育酚总量与组分的影响，并分析了其中的原因，为通过合理的氮肥施用方案配置，以达到最理想的菜籽生育酚含量或组分提供依据。
研究方法：采用盆钵实验控制氮肥施量与流失的精准方法，五种基因型、二种氮肥种类、三档施量水平，三重复控制误差；尝试用气相色谱法检测菜籽生育酚含量的新方法。
重要结论：尿素比硝酸氨更有利于菜籽总生育酚、阿尔法生育酚及伽马生育酚的有效形成；提高氮肥施量对于菜籽形成高含量的总生育酚与伽马生育酚非常有效，但对提高菜籽阿尔法生育酚含量的效果却不太明显。
关键词组：油菜；氮肥施量；尿素；硝酸氨；生育酚
S. M. Rahim, A. G. Mazlan, K. D. Simon, J. P. Delaunoy, P. Laurent
DOI: 10.1631/jzus.B1200297 Downloaded: 3496 Clicked: 10869 Cited: 5 Commented: 0(p.194-200) <Full Text><PPT> 1848
研究方法：免疫组织化学染色技术。
重要结论：免疫组化结果显示碳酸酐酶分布在假腮细胞中，更精确地说是在其细胞顶端分布。细胞基底端、管状系统、毛细血管和柱细胞均无免疫染色。免疫细胞化学定位进一步验证了这些结果，并显示一部分是细胞质碳酸酐酶，其余的与细胞膜结构连接。此外，腔隙层未显示出免疫过氧化物酶的活性。本研究揭示了假腮碳酸酐酶的功能与细胞外介质有关，碳酸酐酶能干预传入神经纤维刺激机制。
关键词组：碳酸酐酶；假鳃；虹鳟；免疫组化；免疫细胞化学；生理学