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Journal of Zhejiang University SCIENCE B
ISSN 1673-1581(Print), 1862-1783(Online), Monthly
2017 Vol.18 No.12 P.1031-1122
Articles
Xi-han Guo, Juan Ni, Jing-lun Xue, Xu Wang
DOI: 10.1631/jzus.B1600542 Downloaded: 2928 Clicked: 5716 Cited: 1 Commented: 0(p.1031-1045) <Full Text><PPT> 1791
创新点：首次发现PE能减弱MMC和cDDP对人正常结肠上皮细胞基因组的损伤以及降低基因组受损细胞的克隆形成能力和克隆异质性。
方法：人结肠癌Colo205细胞和人正常结肠上皮NCM460细胞分别经PE、PE+MMC组合或PE+cDDP组合处理72 h。细胞增殖用台盼蓝拒染法和克隆形成法测定，遗传毒性用胞质分裂阻断微核分析法（CBMN）测定。
结论：结果显示，PE可以显著增强MMC和cDDP的抗Colo205细胞增殖能力（图1）。同时，PE显著降低MMC和cDDP诱导的NCM460细胞基因组不稳定现象，包括降低微核、核质桥和核芽（表1和图2）以及多核化细胞（图3）。此外，PE显著降低经MMC和cDDP处理的NCM460细胞克隆性扩增能力，并降低克隆的异质性（图4）。综上所述，PE不仅能增强MMC和cDDP的抗癌能力，还可能具有减弱它们诱发正常细胞恶性转变的潜力。
关键词组：余甘子；丝裂霉素C；顺铂；基因组不稳定；胞质阻断微核分析
Li-na Pan, Yuan Zhang, Chang-jun Zhu, Zhi-xiong Dong
DOI: 10.1631/jzus.B1700129 Downloaded: 2449 Clicked: 4694 Cited: 0 Commented: 0(p.1046-1054) <Full Text><PPT> 1689
创新点：首次发现驱动蛋白KIF4A的C端区与肺耐药相关蛋白LRP的N端区结合，且KIF4A调节LRP在胞内分布依赖KIF4A的N端马达结构域。
方法：应用免疫共沉淀和免疫荧光技术检测KIF4A与LRP的结合。根据KIF4A及LRP蛋白结构，构建绿色荧光蛋白（GFP）融合KIF4A截短突变质粒及Flag融合LRP截短突变质粒，免疫沉淀分析KIF4A与LRP相互作用区域。通过RNA干涉（RNAi）内源KIF4A，外源转入KIF4A截短突变体质粒，检测LRP在胞内分布。
结论：本实验中免疫沉淀及免疫荧光结果显示，KIF4A与LRP结合，且在微管上有共定位（图1）。截短突变体免疫沉淀实验结果表明，KIF4A的C端尾部结构域与LRP的N端区结合（图2），RNAi敲降内源KIF4A表达导致LRP聚集在细胞核周围（图3），外源表达全长KIF4A可恢复LRP在胞内弥散状定位，但外源表达KIF4A的C端或N端截短突变无法恢复LRP的胞内定位，仍聚集在核周区域（图4）。综上所述，驱动蛋白KIF4A可与LRP结合，并调节LRP在胞内定位，KIF4A的C端尾部结构域与LRP结合，N端马达结构域促进LRP在胞内运输，二者缺一不可。
关键词组：驱动蛋白（KIF4A）；肺耐药相关蛋白（LRP）；耐药
Yan-long Zhao, Pu-xun Tian, Feng Han, Jin Zheng, Xin-xin Xia, Wu-jun Xue, Xiao-ming Ding, Chen-guang Ding
DOI: 10.1631/jzus.B1700003 Downloaded: 3504 Clicked: 5480 Cited: 0 Commented: 0(p.1055-1063) <Full Text><PPT> 1925
创新点：首次对比分析脾脏、腹腔和骨髓源性巨噬细胞在安静（M0）及极化状态（M1和M2）下的特征。
方法：通过小鼠脾脏研磨及单细胞贴壁获得脾源性巨噬细胞；腹腔灌洗及细胞贴壁获得腹腔源性巨噬细胞；骨髓贴壁细胞在巨噬细胞集落刺激因子体外刺激下培养7天获得骨髓源性巨噬细胞。三种细胞即为M0型巨噬细胞，M0在干扰素及脂多糖刺激下获得M1型巨噬细胞，M0在白介素4（IL-4）刺激下获得M2型巨噬细胞。通过流式细胞仪分析三种类型巨噬细胞在三种状态下的II类主要组织相容性复合体（MHC II）和CD86表达差异。通过实时荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、甘露糖受体（MR）和类几丁质酶3样分子（Ym1）的表达变化。
结论：骨髓贴壁细胞培养能获得最大量的同源巨噬细胞（图1和2），但表型偏向于M2型巨噬细胞 （图3和4）。三种巨噬细胞均能极化为M1和M2型巨噬细胞（图5），其中SPMs具有更强的M1型极化能力，而M2型极化能力之间未见明显差异（图6）。综上所述，三种细胞无论在安静及极化状态下均具有不同的特征，骨髓可以获得大量同源性巨噬细胞，但性质不同于组织源性的脾脏和腹腔巨噬细胞。
关键词组：巨噬细胞；脾脏；腹腔；骨髓
Mohammed A. El-Magd, Ayman A. Saleh, Abeer A. Nafeaa, Shymaa M. El-Komy, Mohamed A. Afifi
DOI: 10.1631/jzus.B1600573 Downloaded: 3118 Clicked: 6386 Cited: 0 Commented: 0(p.1064-1074) <Full Text><PPT> 1899
创新点：发现IGF1基因多态性对埃及水牛的生长性状、血液生化指标和基因表达有显著影响，并为埃及水牛的选育提供重要的分子遗传标记。
方法：以200头埃及水牛为试验对象，对其IGF1基因的多态性进行检测，并分析其与生长性状、血液生理生化指标和基因表达的相关性。
结论：在水牛IGF1基因多态性分析中，发现两个新的SNP位点（G64A和G280A）分别分布在外显子1和外显子4的非编码区。不同基因型的统计分析表明，G64A和G280A位点的GG基因型水牛个体分别在3~6月龄和6~9月龄的体重（BW）和平均日增重（ADG）均显著高于其他基因型（P<0.05）。这两个SNPs位点的组合基因型产生了三种单倍体GG/GG、AG/AG和AA/AA。在3~12月龄的水牛个体中，单倍体基因型与BW和ADG存在显著关联（P<0.0001）。纯合的GG/GG单倍体基因型水牛生长性能优于其他水牛。两个SNP位点与半腱肌中IGF1和IGF1R的mRNA水平以及IGF1血清浓度水平相关。此外，GG/GG单倍体水牛表现出较高的mRNA和血清浓度水平。综上所述，这两种SNP位点G64A和G280A可作为埃及水牛生长性状选育的重要分子遗传标记。
关键词组：胰岛素样生长因子1（）；胰岛素样生长因子1受体（）；单核苷酸多态性（SNP）；生长性状；水牛
Monoclonal antibody-based serological assays for detection of Potato virus S in potato plants
Ge Song, Jia-yu Wu, Yan Xie, Yong Liu, Ya-juan Qian, Xue-ping Zhou, Jian-xiang Wu
DOI: 10.1631/jzus.B1600561 Downloaded: 2818 Clicked: 5533 Cited: 0 Commented: 0(p.1075-1082) <Full Text><PPT> 1886
创新点：首次制备了抗PVS的高度特异和灵敏的单克隆抗体，并以制备单抗为核心建立三种能快速、准确、灵敏、特异地检测PVS的血清学检测方法。
方法：以差速离心方法提纯的PVS病毒粒子作为免疫原免疫BALB/c小鼠，通过杂交瘤技术获得了能稳定传代并分泌PVS单克隆抗体的杂交瘤细胞株；扩繁的杂交瘤细胞注射到小鼠腹腔获得单抗腹水，并以纯化的制备单抗为核心，根据血清学原理建立检测马铃薯植物中PVS的双抗夹心酶联免疫吸附试验（DAS-ELISA）、斑点酶联免疫吸附试验（dot-ELISA）和组织印迹酶联免疫吸附试验（tissue print-ELISA）血清学检测方法；并对田间马铃薯样品进行PVS检测，分析建立的血清学方法检测PVS的有效性。
结论：利用杂交瘤技术获得了五株能稳定传代并分泌PVS单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以制备杂交瘤细胞分泌的单抗为核心建立了检测马铃薯植株中PVS的DAS-ELISA、dot-ELISA和tissue print-ELISA三种血清学方法。三种血清学方法检测感染PVS的马铃薯植株呈阳性反应，而检测健康的马铃薯及感染其他三种马铃薯病毒的植株呈阴性反应，且建立的DAS-ELISA和dot-ELISA方法检测马铃薯病叶的灵敏度分别达到1:163 840和1:10 240倍稀释（w/v，g/ml）。田间样品检测结果发现，建立的血清学方法的检测结果与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）的检测结果一致，表明建立的血清学方法可有效地用于马铃薯植物中PVS的检测，从而为我国PVS的田间调查和检测及无毒种薯的生产提供快速、实用的检测技术。
关键词组：马铃薯S病毒；Tissue print-ELISA；Dot-ELISA；DAS-ELISA
Sai-sai Cheng, Yuan Li, Shi-jie Geng, Luan-sha Hu, Xiong-feng Fu, Xin-yan Han
DOI: 10.1631/jzus.B1700180 Downloaded: 2468 Clicked: 5459 Cited: 0 Commented: 0(p.1083-1092) <Full Text><PPT> 1774
创新点：首次证实新鲜发酵豆粕的使用可提高仔猪对日粮氮的利用，降低氮排泄以及降低畜舍氨气和颗粒物浓度。
方法：选择日龄相近的472头保育仔猪（长×大二元杂交，体重(16.3±0.36) kg），随机分为两组，每组236头。对照组饲喂不添加新鲜发酵豆粕的基础日粮，试验组饲喂添加10%新鲜发酵豆粕的日粮（FSM组），两组日粮的粗蛋白含量一致。试验期28天，试验期间监测畜舍氨气和颗粒物浓度（图1和2），试验结束采样进行化学检测。
结论：与对照组相比，FSM组的平均日增重显著提高（P<0.05）。在整个实验过程中，与对照组相比，FSM组猪舍中NH3浓度下降了19.0%（P<0.05），颗粒物（PM10和PM2.5）浓度分别下降了19.9%（P<0.05）和11.6%（P<0.05）。FSM组粪便中氨态氮和亚硝酸盐含量分别增加了32.9%（P<0.05）和28.4%（P <0.05）。与对照组相比，FSM组粪便pH值明显下降（P<0.05）。试验结束时，FSM组的总蛋白浓度显著增加（P<0.05），血清尿素氮（BUN）浓度降低（P<0.05）。结果表明，日粮中新鲜发酵豆粕不仅提高了保育猪的生长性能，而且减少了粪便中氮向NH3的转化，降低了畜舍中PM10和PM2.5的浓度。
关键词组：新鲜发酵豆粕；氨气；颗粒物；氮转化；保育猪
Hui-ying Miao, Meng-yu Wang, Jia-qi Chang, Han Tao, Bo Sun, Qiao-mei Wang
DOI: 10.1631/jzus.B1700308 Downloaded: 2215 Clicked: 5032 Cited: 0 Commented: 0(p.1093-1100) <Full Text><PPT> 1705
创新点：首次发现葡萄糖和赤霉酸可以协同促进芥蓝芽菜中几乎所有种类芥子油苷以及总芥子油苷的积累，并且可以大幅度提升总多酚的含量以及抗氧化能力。
方法：以芥蓝芽菜为材料，使用3%（0.03 g/ml）葡萄糖和5 µmo/L赤霉酸进行外源处理，以水处理作为对照组。用高效液相色谱法分析芥子油苷和维生素C的含量；采用分光光度法检测花青素的含量；用Folin-Ciocalteu试剂法测定总多酚的含量；利用亚铁还原能力实验（FRAP）法进行总抗氧化能力的评估。
结论：葡萄糖和赤霉酸共同处理可以有效提升芥蓝芽菜中有益健康的植物化学物质含量以及抗氧化能力。
关键词组：芥子油苷；抗氧化物；葡萄糖；赤霉酸；芥蓝芽菜
Mei-lin Cui, Huan-yi Yang, Guo-qing He
DOI: 10.1631/jzus.B1700189 Downloaded: 2586 Clicked: 5041 Cited: 0 Commented: 0(p.1101-1112) <Full Text><PPT> 1921
创新点：灵芝是一种珍贵的药用真菌，大豆异黄酮的苷元物质也具有重要的药理活性，本文首次利用灵芝菌液体发酵的匀浆液生物转化大豆异黄酮，所得到的产物中大豆苷元与染料木素转化率高，同时还富集了灵芝菌的活性成分，并对转化产物的抗癌活性及机理进行了初步探讨。
方法：首先利用灵芝菌液体发酵的匀浆体系生物转化大豆异黄酮（图1）。其次，对转化产物的抗癌活性进行研究，主要包括对癌细胞存活率（图2）、细胞凋亡（图3）及细胞周期分布（图4）的影响。最后，利用蛋白质印迹（Western-blot）与逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术对凋亡相关的基因和蛋白进行检测（图5和表2），初步探讨转化产物的体外抗癌机理。
结论：本实验结果显示，转化产物中大豆苷元及染料木素的转化率分别为96.63%和87.82%，其中染料木素的含量可达(703.21±4.35) mg/g，同时转化产物中还富含了灵芝菌的活性成分。其次，对转化产物抗癌活性研究发现，其能有效降低HTL-9细胞的存活率，可通过将细胞阻滞于G1期而诱导细胞晚期凋亡。此外，转化产物（100 µg/ml）还可明显上调Bax、Caspase-3、Caspase-8、Cyto-c和p53的表达量，而Survivin和NF-κB表达量发生明显下调。结果表明，转化产物主要通过线粒体途径诱导细胞凋亡，但同时还调控多个与凋亡相关的基因。
关键词组：大豆异黄酮；灵芝；转化；抗增殖活性；凋亡
Yong Zheng, Qiang Gu, Hong-Wu Chen, Huai-Ming Peng, Dong-Yu Jia, Yu Zhou, Mei-Xiang Xiang
DOI: 10.1631/jzus.B1700229 Downloaded: 2197 Clicked: 4977 Cited: 0 Commented: 0(p.1113-1122) <Full Text><PPT> 1702
创新点：胺碘酮、利多卡因对于预防ACC后再灌注VF的效果，目前相关的随机对照试验（RCTs）并无统一的结论，本研究综合之前RCTs进行荟萃分析。
方法：遵循PRISMA和Cochrane系统评估手册对PubMed、EMBASE及Cochrane进行文献检索 （图1），荟萃分析符合要求的RCTs。
结论：当前的证据表明胺碘酮和利多卡因在开胸心脏手术中预防再灌注VF的效果两者之间并无显著差异，但均明显优于安慰剂；在随后需要电除颤的患者的比例上，胺碘酮、利多卡因及安慰剂三者间无统计学差异。
关键词组：胺碘酮；利多卡因；再灌注室颤；心脏手术